牛血清白蛋白是实验室中广泛使用的蛋白质工具，常用于生物化学、分子生物学、细胞生物学等领域。其功能多样，可作为标准蛋白、稳定剂、载体蛋白或阴性对照。以下从储存、配制、实验应用及注意事项等方面详细阐述其使用细节。

　　一、基本特性与适用场景

　　BSA是从牛血清中提取的球蛋白，占血清蛋白总量的60%，分子量约66 kDa，等电点4.7-5.2。其核心作用包括：

　　- 标准化蛋白：用于Bradford、BCA等蛋白浓度测定方法的参考标准。

　　- 稳定剂：维持酶、抗体、核酸等生物活性物质的稳定性，减少吸附损失。

　　- 封闭剂：在Western Blot中封闭膜上非特异性结合位点。

　　- 细胞培养添加剂：提供氨基酸、缓冲能力及营养支持。

　　- 载体蛋白：辅助脂质体、纳米颗粒等制剂的分散与稳定。

　　二、储存与分装规范

　　1. 储存条件

　　- 干粉形式：-20℃密封保存，避免吸潮或污染。

　　- 溶液形式：4℃短期保存(建议1周内用完)，长期需分装后-80℃冻存，避免反复冻融(最多3次)。

　　- 关键提示：反复冻融会导致BSA聚合或降解，影响实验结果。

　　2. 分装建议

　　- 根据实验需求将干粉分装为小份(如1 g/管)，避免多次取用造成污染。

　　- 配制后的溶液建议用0.22 μm滤膜过滤除菌，并标注浓度、日期及用途。

　　三、溶液配制要点

　　1. 溶剂选择

　　- 常用溶剂：超纯水、PBS(pH 7.2-7.4)或生理盐水。

　　- 避免使用含强酸/碱、还原剂(如DTT)或变性剂(如SDS)的溶液直接溶解BSA。

　　2. 配制步骤

　　- 称重：精确称取BSA干粉(如1 g、5 g)，避免吸潮结块。

　　- 溶解：缓慢加入溶剂，磁力搅拌至溶解(可4℃过夜搅拌)。

　　- 过滤：用0.22 μm滤器灭菌，分装后标记浓度(如10 mg/mL)。

　　- 验证浓度：通过紫外分光光度法(A280 nm，消光系数1.0)或BCA法校准实际浓度。

　　3. 浓度范围

　　- 常规用途：0.1%-2%(w/v)，例如1 mg/mL用于封闭，10 mg/mL用于浓缩储备液。

　　- 高浓度溶液可能因盐离子或pH不当导致沉淀，需优化溶剂条件。

　　四、实验应用场景

　　1. 蛋白定量标准品

　　- 用于Bradford或BCA法时，需制备梯度稀释的标准曲线(如0-2000 μg/mL)。

　　- 注意：不同批次BSA可能因纯度差异导致标准曲线偏移，建议同一实验使用同一批号。

　　2. 酶或抗体的稳定剂

　　- 在酶反应体系中添加0.1%-0.5% BSA，可减少酶在塑料表面的非特异性吸附。

　　- 抗体稀释液中加入BSA(如1%-5%)可提高稳定性，但需验证是否干扰后续检测(如ELISA)。

　　3. Western Blot封闭液

　　- 配方示例：5% BSA + TBS-T(室温振荡1小时)。

　　- 替代方案：若需低背景，可用脱脂奶粉或Casein替代，但BSA更适合磷酸化蛋白检测。

　　4. 细胞培养补充剂

　　- 添加浓度：0.1%-1%(w/v)，需确保无支原体污染。

　　- 注意：某些细胞系对BSA敏感，需测试兼容性(如原代神经元培养)。

　　5. 脂质体或纳米颗粒制备

　　- 作用：包裹疏水药物或RNA，减少聚集。

　　- 典型条件：BSA与脂质质量比1:10，超声前混合均匀。

　　五、注意事项与常见问题

　　1. 防污染与失活

　　- BSA溶液易滋生细菌，建议添加0.01%-0.05%叠氮钠(NaN3)防腐，但避免用于细胞培养。

　　- 变质特征：溶液浑浊、沉淀或异味，需立即丢弃。

　　2. 批次差异与纯度

　　- 不同品牌或批次的BSA可能存在纯度差异(如脂肪酸、内毒素含量)，关键实验需预测试。

　　- 高纯度级别(如透析级、低内毒素)适用于细胞实验，普通级可用于蛋白定量。

　　3. 沉淀问题

　　- 原因：溶剂pH偏离中性、高浓度盐离子、金属离子残留或低温储存析出。

　　- 解决方案：调节pH至7.0-7.5，加入EDTA螯合金属离子，或适当降低浓度。

　　4. 兼容性测试

　　- 使用BSA作为添加剂时，需验证是否干扰检测信号(如荧光标记、ELISA显色)。

　　- 例如：高浓度BSA可能淬灭某些荧光染料，需优化浓度。

　　六、特殊场景优化方案

　　1. 高温/变性环境

　　- BSA在60℃以上易变性，如需用于高温反应体系，可选择热稳定性更高的重组蛋白(如GroEL)。

　　2. 低浓度蛋白保护

　　- 当目标蛋白浓度极低时，添加0.1% BSA可减少吸附损失，但需平衡背景噪音。

　　3. 去除内毒素

　　- 细胞实验中使用的BSA需为低内毒素级(<3 EU/mg)，可通过凝胶色谱或亲和层析进一步纯化。