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血小板裂解物的制备方法有哪几种?
发布时间:2021-11-02浏览:129次
血小板中含有很多不同的细胞生长因子,包括PDGF, VEGF,EGF等,存在血小板颗粒中的大量生长因子和细胞因子可以通过凝血酶激活和凝固自然释放,也可以通过冷冻/解冻介导的血小板溶解、超声或化学治疗人工释放。以不同的释放策略制备的人血小板裂解物被视为可以替代胎牛血清(FBS)作为培养基补充剂的合适选择,使人类细胞在无动物血清条件下高效增殖,在体细胞治疗和组织工程中具有广泛的应用前景。
 
血小板裂解物的制备方法有哪几种?
 
诱导血小板释放生长因子和其他生物活性分子的四大方法:
 
(1)多次冷冻/解冻循环(反复冻融法):
 
多次冷冻/解冻循环是常见的简单有效和经济的方式诱导血小板激活释放因子。典型的情况是,浓缩的血小板在-80℃时被休克冷冻,37℃时解冻,从而使血小板激活和碎裂。
 
(2)直接激活法:
 
这种方法是加入钙盐溶液(通常是CaCl2),以激活内源性凝血酶,从而纤维蛋白形成和血小板脱颗粒。也有人或重组凝血酶的直接激活,但重组凝血酶的使用可能会使HPL用于细胞治疗的监管和批准复杂化。
 
(3)声波降解法:
 
多年来,超声单独或与冷冻/解冻循环相结合也被用作一种快速、高效和经济高效的释放血小板的方法。在20kHz频率下超声作用30分钟可有效释放血小板颗粒含量。
 
(4)溶剂/洗涤剂 (S/D)处理:
 
从制备工艺上来说,S/D处理法略微复杂。用1%磷酸三丁酯(TNBP)和1%的TritonX-100在30℃下处理新鲜冷冻血浆(FFP)4小时,制备S/D-FFP。添加的试剂用大豆油萃取和不溶性C18树脂层析除去。用S/D-FFP免疫家兔,然后用未经处理的FFP吸附诱导的抗体,证实没有新的免疫原的形成。这种方法还有一个好处就是可以灭活被脂质包裹的病毒。
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