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淋巴细胞分离液分离原理和使用
发布时间:2021-09-10浏览:93次
淋巴细胞分离液是一种根据细胞密度差异,借助离心产生的重力加速度,进行细胞的分离纯化的常用试剂。常用的淋巴细胞分离液有Ficoll淋巴细胞分离液、Percoll淋巴细胞分离液。Ficoll与Percoll分离单个核细胞的方法均为密度梯度离心法。
 
分离原理:外周血中单个核细胞和单核细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同,淋巴细胞分离液是一种密度介于1.075~1.090之间而近似于等渗的溶液,用它做密度梯度离心,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离。
 
淋巴细胞分离液的使用方法:
 
1、准备无菌的15ml离心管或锥形管; 
2、加入淋巴细胞分离液3ml;(注意:淋巴细胞分离液使用前需恢复室温,18-25℃)
3、Hank~s液或PBS缓冲液1:1比列(如果全血样本粘稠,可适当增大比例)稀释抗凝过的全血样品。
4、小心沿着壁管,接近分离液层面,非常缓慢地加入新鲜的稀释过的全血样品在淋巴细胞分离液上面;(切记不要搅浑淋巴细胞分离液)
5、小心放进离心机(水平转子),4℃离心20-30分钟,速度为400g-1000g;(注意:离心机刹车应取消,需等待自然停止)
6、小心取出离管,切记不要震动;
7、可见上层为淡红色透明血浆,其次为薄薄的只密白色环,白色环卫单核细胞淋巴细胞。
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