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淋巴细胞分离液的原理及使用注意事项
发布时间:2020-10-28浏览:561次
淋巴细胞分离液是一种根据细胞密度差异,借助离心产生的重力加速度,进行细胞的分离纯化的常用试剂。可用于体外分离外周淋巴血细胞,也可以从其他来源中分离单核细胞,包括脐带血细胞和骨髓细胞,适用于从血液及组织匀浆中分离所需细胞,在医疗和医学生物中广泛应用。其他人及动物多种比重细胞分离液。
 
淋巴细胞分离液的原理:
 
外周血中单个核细胞和单核细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同.淋巴细胞分离液是一种密度介于1.075∽1.090之间而近似于等渗的溶液,用它做密度梯度离心,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离。
 
淋巴细胞分离液使用时需要注意:
 
1.在正常大气压下,分离液、分离样本以及分离环境温度为20℃±2℃。分离液在低温时呈较高密度,在高温时呈较低密度。细胞分离液从冰箱取出后,不可立即使用,操作前可将样本和分离液复温至18-22℃。为获得理想的实验结果,在取血后2小时内进行实验,血液提取后存放时间越长细胞活性越低。
2.实验过程中,如需稀释血液或洗涤细胞,不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液,其成分会导致血细胞凝集,大大降低细胞得率及纯度。
3.抗凝剂选择:EDTA、枸橼酸、肝素,其他抗凝剂也可使用,但会影响细胞活性。应注意在血液稀释过程中去除抗凝剂体积。
4.实验操作时,不可使用含粉手套、不可使用内毒素含量过高的液体,手套中的粉末颗粒及高内毒素会激活淋巴细胞从而降低细胞得率及活性。
5.不可使用高聚合材质(如聚苯乙烯)的塑料制品,其带有的静电作用将导致细胞贴壁影响分离效果。推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。
6.吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。吸取过多的淋巴细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。
7.如需进行B、T细胞计数,则需血液贮藏时间不得多于10小时,否则将导致细胞被激活,得率降低。
8.为去除所混杂的血小板,可在分离液上层加上4-20%蔗糖梯度等渗溶液进行二次离心。
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