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澳洲胎牛血清的制备过程来了解下
发布时间:2019-10-07浏览:182次
   澳洲胎牛血清是一种性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛。显然,胎牛血清是品质高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分少。
  澳洲胎牛血清主要用途:
  牛血清是细胞培养中用量大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。
  1.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
  2.提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。
  3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
  4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
  5.起酸碱度缓冲液作用。
  6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
  具体澳洲胎牛血清制备操作方法如下:
  首先、血液采集
  1、挑选出大约8月龄以上的健康妊娠母牛,经剖腹获取小牛。
  2、将小牛清洗干净后,侧放在万级洁净房间内的采血台上,固定四肢及头部。
  3、用来苏水清洗心脏外部,刮去心脏外部牛毛,露出心脏外部一侧皮肤,用2%碘酒擦拭消毒。
  4、在心脏部位切开一道10厘米左右的切口,取出近心血管,先用2%碘酒消毒,再用75%的酒精消毒,用止血钳夹住血管,切开1厘米左右的切口进行插管,插好管后打开血管的止血钳,让牛血顺采血管流入另一个洁净房间内的采血瓶中。
  5、采血瓶采血前经干烤灭菌(180℃2小时)后,按无菌操作注入10毫升左右经高压灭菌的生理盐水后加塞封口,于采血前半小时放入37℃恒温箱备用。采血前先晃动瓶内生理盐水,使其充分湿润瓶壁后倒出,再进行采血并加塞封口。将采血后的采血瓶放37℃恒温室2小时,再放入4℃冷库4小时以备离心。
  第二步、离心
  将准备好的采血瓶放入离心套筒调好平衡后,对称放入离心机,按1800转/分钟离心50分钟后,放入4℃冷库备用。
  第三步、抽血清
  取出4℃冷库离心好的采血瓶,注意轻抬轻放,以免将下层血块和血清混层。将经过高压灭菌装有两孔瓶塞的5000ml大瓶的抽气孔一端的管子接好空气滤器,再接到压缩机抽气口上。打开压缩机,用抽血清孔的管子轻轻抽取采血瓶内的上清液,注意控制好抽管,避免抽到下层血块。将抽好的血清分装,即为粗制胎牛血清,放入-20℃冷库冷藏备用。
  第四步、澳洲胎牛血清过滤
  1、将-20℃冷库内的粗制血清取出化冻。
  2、将化冻后的粗制血清用经过高压灭菌的12层医用脱脂棉纱布进行初滤。
  3、把初滤后的血清倒入大罐进行混合。
  4、将装好滤芯的滤器做密封性试验和发泡试验合格后,经过高压灭菌,在洁净室内用无菌操作法将滤器按滤柱孔径由大到小的顺序进行组装,并装上压力表。把滤器大孔径一端和蠕动泵出口进行连接。
  5、用蠕动泵将大罐内的血清送入滤器进行过滤。
  6、将滤出的血清在百级净化操作台上进行分装后,即为精制胎牛血清,送-20℃冷库储存。
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