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关于NK培养基的五个优点以及七个操作步骤
发布时间:2019-09-09浏览:288次
   NK培养基是为哺乳生物来源的NK细胞培养而设计的,培养基包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质、血清替代物以及其他补给成分。产品严格无菌,无病毒和支原体,性能稳定的核心是采用无血清替代物为细胞提供一个营养全面和平衡的环境,不仅包括NK细胞生长的一切养分,还包括促进DC细胞吸附、活化、增殖的添加物,产品适用于人及哺乳类动物NK细胞的培养、活化及增殖。
  NK培养基产品特点:
  1、培养性能优越,支持高密度NK细胞培养;
  2、可以培养纯度比较低的细胞样品,培养获得高纯度的NK细胞(CD56+/CD3-);
  3、如果培养时添加病人自体血浆,效果更为显著;
  4、经过微生物检测(细菌、真菌、霉菌及支原体)、pH检测、渗透压和内毒素检测;
  5、不含任何动物源的蛋白成分。
  NK培养基培养操作步骤
  1、培养皿的包被:按一个10-cm培养皿的表面积计算,将2mlAdvCell细胞垫(BCP0001)与20lAdvCellNK细胞附物(BNKA001)混合后加入培养皿中,4℃下包被过夜。
  2、按常规免疫细胞培养的一般准则,如需在生物反应器或培养袋中高密度培养,应优化条件来确定操作步骤。使用前将BNSFM0001中的5种组分按如下体积比在37℃下解冻之后混合混合成完全培养基:500mlAdvCell免疫细胞基本培养基(BICBM0001)、20mlAdvCell免疫细胞添加物A(BICS0001A)、1mlAdvCell免疫细胞添加物B(BICS0001B)、1mlAdvCellNK细胞添加物A(BNKS001A)、1mlAdvCellNK细胞添加物B(BNKS001B)。
  3、抽取患者外周血50ml,将采集的血样转入50ml离心管,2000rpm离心10min。离心结束后,用移液器吸取上层淡黄色血清于新的50ml离心管,盖好离心管盖于40℃水浴锅中孵育30min。孵育结束后,再1400rpm(340g)离心10min,吸取上清于新的离心管保存4℃备用。
  4、用移液管将下层的血细胞与生理盐水1:1混匀,按1:1将悬液缓慢加入装有淋巴细胞分离液的离心管(注意:不要打乱液面分界保持液面分层明显)。将离心机的升速与降速调至低,400g离心30min;离心结束后,用5ml移液管吸取中间白膜层于新的50ml离心管,并用生理盐水洗涤离心两次,以去除多余血细胞。
  5、根据计数结果调整细胞浓度,充分混匀后按1-2×106/ml密度接种于含免疫细胞基本培养基(BICBM0001)的培养瓶中,并按10-cm培养皿的表面积添加20lAdvCellNK细胞添加物B(BNKS001B)。当细胞生长到第三天离心换液(340g离心10min)更换新鲜培养基及AdvCellNK细胞添加物B。
  6、以后4-6天每天镜检观察,根据细胞悬液颜色添加培养液,每次添加应为总体积的三分之一左右。第七天计数,当细胞量大于6×107时,则添加AdvCellNK细胞添加物B;如细胞数量在3-6×107时,则长至第八天添加AdvCellNK细胞添加物B,加液时使总细胞浓度保持在1-1.5×106cell/ml。
  7、当培养液体积大于150ml或细胞数量大于1.5×108时则需转移至培养袋培养(气泡尽量排空,以免影响细胞生长)。第8-11天每天镜检观察计数,根据细胞悬液颜色加培养液。第12-14天观察需加液时,细胞浓度需保持在2×106cell/ml。当细胞达到所需剂量时,即可离心收集细胞待用。
  以上就是NK培养基的产品特点和七个培养步骤介绍,给大家参考,并希望有所帮助!
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