服务热线:
021-52717801
技术支持

您现在的位置:首页  >  技术文章  >  细胞培养的具体步骤

细胞培养的具体步骤
发布时间:2018-12-04浏览:859次
细胞培养需要提供合适的温度和气体环境,因此一般采用培养箱的形式来满足细胞培养的要求。
 
细胞培养的具体步骤:
 
1、细胞复苏
 
将冻存细胞从液氮中取出后,在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中,加入10ml预热的DMEM完全培养基,轻轻吹匀,离心,2000rpmX2min,弃上清液。
 
加入10ml DMEM培养基清洗,弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基,轻轻吹打,接种于10cm盘中,在含5%CO2的细胞培养箱中培养。
 
2、细胞传代
 
细胞密度达到80%~90%时.去培养基,10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化,转移至15ml离心管。
 
加入10ml PBS清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管,2000rpmX2min,弃上清液。再加入10ml PBS(经高压灭菌,保存于40C),吹匀,吸取10微升进行计数,按照1×106/盘接种,在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。
 
3、细胞冻存
 
细胞密度达到80%~90%时,去培养基,10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完全培养基终止胰酶消化,转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管,2000rpmX2min,弃上清液。
 
加入lml冻存液(90%血清,10%DMSO),放入冻存盒内(盒内有异丙醇,以保证温度降低的速度),立即放入一80℃冰箱内,过夜,第二天放入液氮中,可以保存至少两年,如不放人液氮,可以保存三个月。
上海微科生物技术有限公司(www.weike-biotech.com)主营:NK培养基,血小板裂解物,IPS培养基 备案号:沪ICP备16042879号-1

技术支持:化工仪器网    管理登陆    网站地图

联系电话:
13501794748

微信服务号